开学学习计划,ELISA从新手到入门!

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ELISA简介

ELISA即为酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一种常用于检测和定量分析生物样本中抗体、抗原、蛋白质等物质的实验方法。它利用抗原和抗体之间的特异性结合以及酶催化反应的原理,进行定性或定量的分析。

不同ELISA检测方法比较

常见的ELISA有四种,双抗夹心法、直接法、间接法、竞争法。

ELISA实验原理

以市面上最常见的双抗体夹心法为例,其原理就是先将特异性捕获抗体预包被在高亲和力的酶标板上,酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育、洗涤后,加生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的抗原与固相抗体和检测抗体结合。洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。再次洗涤后,加入显色底物,避光显色。颜色反应的深浅与样本中待测物浓度成正比。

不同ELISA检测方法比较

优点:

1.ELISA样本制备简单;

2.灵敏度高(pg/ml);

3.特异性强;

4.重复性好;

5.操作简单;

6.检测仪器易获得:能够检测 450nm 吸光度的酶标仪,参考波长 570nm 或 630nm。

ELISA 应用场景

ELISA测抗原
  • 细胞因子检测:TNF、VEGF、白介素等;

  • 肿瘤标志物:甲胎蛋白、癌胚抗原等;

  • 激素:胰岛素、雌二醇、皮质醇等;

  • 载脂蛋白:ApoA-l、Apo-E等;

  • 检测血液中的药物浓度:治疗心脏病的药物地高辛、抗生素庆大霉素等。

ELISA测抗体
  • 病毒检测:流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒、狂犬病毒等检测;

  • 自身免疫病抗体测定;

  • 过敏诊断:检测过敏原的抗体。

ELISA 应用领域