01. ELISA通关必备丨基础知识
ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay 酶联免疫吸附检测，利用抗原抗体的特异性反应，对样本中可溶性目的产物进行定量检测。 ELISA 与常规免疫实验对比 ELISA样本制备简单；灵敏度高（pg/ml）；特异性强；重复性好；操作简单；检测仪器易获得。 Western Blot IHC/IF ELISA 定性 定性 定性 半定量 半定量 定量 半定位 定位 非…
2022-06-27
02. ELISA通关必备丨试剂盒构成及检测原理
ELISA简要操作步骤及原理 以双抗体夹心法为例，ELISA简要操作步骤如下： 包被抗体包被到酶标板 加样本/标准品 加生物素标记的检测抗体 加HRP标记的链霉亲和素 加显色底物TMB 加终止液 ELISA 试剂盒组分 酶标板（Microplate） 酶标板，在ELISA（酶联免疫吸附测定）中作为载体的酶标板对抗原抗体或抗原抗体复合物的吸附起着重要作用。 标准品（Standard） 标准品即为已知…
2020-06-28
03. ELISA通关必备丨如何选择试剂盒
小伙伴们为ELISA实验选购试剂盒时，是不是有很多问号?选什么物种？什么指标？什么检测限？怎样的精密度，稀释线性，特异性是优秀的？ 小科整理了ELISA产品相关要素，助您五分钟掌握如何选到适合自己实验的试剂盒。 ELISA产品选择要素 根据实验物种及待检样品性质来选择种属：人、小鼠、大鼠、鸡、牛、猴等；样本类型：血清、血浆、组织培养上清、组织或细胞裂解物。 根据样品中检测物水平选择宽动力学检测范围…
2022-06-29
05. ELISA通关必备丨样本篇丨常见样本丨细胞
利用ELISA（酶联免疫吸附测定）进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对常见细胞样本处理方法整理，希望对您有所帮助。 细胞样本根据目的物所在部位可选择细胞裂解液或细胞培养上清作为样本。 需要注意的是： 因该类样本干…
2022-08-16
06. ELISA通关必备丨样本篇丨常见样本丨组织
利用ELISA（酶联免疫吸附测定）进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对常见组织样本处理方法整理，希望对您有所帮助。 ■ 组织样本一般是制成组织匀浆，处理方法如下： 取适量组织块，于预冷PBS（02mol/L, …
2022-08-29
07. ELISA通关必备丨样本篇丨不常见样本
利用ELISA（酶联免疫吸附测定）进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对几种不常见样本处理方法整理，希望对您有所帮助。 唾液 在唾液样本采集之前，受试者被建议不要吃东西、抽烟或喝饮料。用盐水彻底漱口后，采集唾液3 …
2022-09-14
08. ELISA通关必备丨操作篇丨溶解与稀释标准品
ELISA标准曲线是结果计算的尺子，标准品是ELISA 实验成功与否的关键点。怎样正确溶解、稀释标准品呢？ 粉末标准品短暂离心，让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震荡，室温静置溶解 10-30min，让粉末完全溶解。注意：加水后暂不用移液枪吹吸，避免蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。 标准品梯度稀释： 标准品稀释液…
2022-10-10
09. ELISA通关必备丨操作篇丨加样与洗板
ELISA 加样操作要点 精准的仪器和准确的操作是保证ELISA结果准确关键，怎样的加样方式才是正确呢？ELISA实验中一般有5次加样，即加标本、加检测抗体、加酶结合物和加显色底物及终止液。小科将ELISA加样操作要点进行归纳，供参考。 实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致最后读数差别，因此避免仪器带来误差。 加样前，溶液充分混匀，垂直悬空加入液…
2022-11-02
10. ELISA通关必备丨操作篇丨常见问题及解决方案
一、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？ 温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。 二、如何获得良好线性的标准曲线？ 按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的…
2022-12-06
11. ELISA通关必备丨结果篇丨白板与花板
一、白板 如果显色完成后，肉眼可见整板没有显示反应，可能原因及应对方法是什么呢？小科整理了可能的原因，希望对您有帮助。 序号可能原因解决方案 1试剂盒储存不当；不同试剂盒试剂混用购买新的试剂盒，注意储存条件；不可混用 2孵育温度低，时间短如果温度偏低，则延长孵育时间和显色时间 3错加、漏加试剂严格按照说明书步骤添加正确试剂 4用于配置溶液的容器不干净，或水有问题使用干净容器以及合格的蒸馏水 5检测…
2022-12-19
12. ELISA通关必备丨数据篇丨数据分析与标曲拟合
做完ELISA实验，测完吸光度，数据怎么处理？标准曲线不是直线怎么办？小科整理了ELISA数据处理相关知识，希望对您有帮助。 一、ELISA 标准曲线分析步骤 标曲和样本孔的每个孔 450nm 的OD值减去630nm（或570nm）的OD值； 再将获得的标曲和样本孔数据分别减去空白孔Blank的OD值； 以标曲的浓度为横坐标，以上算出的OD值为纵坐标，拟合标曲（选择R2值大于0.99的比较好的拟合…
2023-01-09
13. ELISA通关必备丨数据篇丨标准曲线不佳
ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因： 一、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围 ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因： 序号 可能原因 解决方法 1 如OD绝对值靠谱，则显色过度 TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断， 当S1，…
2023-01-17
14. ELISA系列 丨Selectin家族
选择素（Selectin，CD62）是一类糖蛋白，在流体动力作用下负责细胞间的异质性相互作用。选择素之所以得名，是因为它们能够通过N末端的胞外C型凝集素结构域结合碳水化合物。 Selectin家族成员 选择素家族由三个成员组成，以其最初被鉴定的细胞类型命名：E-选择素（内皮细胞）、P-选择素（血小板）和L-选择素（淋巴细胞）。他们的CD命名分别是：CD62E、CD62P、CD62L。…
2023-05-08