蛇年第一课|小科带你回顾凋亡实验及其检测要点

细胞凋亡(apoptosis),属于细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是由基因控制的细胞自主、有序的死亡,在维持生物体内环境稳定方面发挥着重要作用。

细胞凋亡与疾病的关系

对于人而言,健康状况下,机体内细胞凋亡处于一个平衡状态。当细胞凋亡出现异常,就极易引发各种疾病。

细胞凋亡典型特征

形态学角度观察细胞凋亡,其过程是多阶段的,首先是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离;然后是细胞质密度增加,线粒体膜电位消失通透性改变,释放细胞色素C胞浆核质浓缩,核膜核仁破碎;胞膜有小泡状形成,膜内侧磷脂酰丝氨酸翻到膜外表面Caspase活化,DNA降解成为约180bp-200bp片段;最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体,无内容物外溢,因此不引起周围的炎症反应。凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。

Annexin V检测凋亡六大注意点

1.接种——对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml,防止密度过大导致细胞自身发生凋亡,造成假阳性。

2.收集——上清及壁细胞全部收集

部分凋亡细胞可能悬浮于培养上清中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。

3.消化——选用Accutase

选用Accutase酶替代普通胰酶。Accutase酶已经在多种细胞系中得到验证,其消化更温和,可有效避免因消化过度使细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻,造成假阳性。(对凋亡不明显的实验强烈推荐)

4.补偿调节——阳性质控

没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门?联科生物凋亡试剂盒配备阳性质控液,补偿调节so easy!

5.补偿——横平竖直

3、4象限横平;2、4象限竖直。

6.漂亮结果——黄金分割(三分原则)


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