Th17：分泌IL-17A、IL-17F、IL-21等细胞因子，主要介导自体免疫反应，增强对细菌和真菌感染的防御。

联科生物可提供小鼠/人的Th1、Th2、Th17和Treg检测试剂盒。下面以小鼠Th1/Th2检测为例。

小鼠Th1/Th2检测试剂盒组分

1a. 对于肝素抗凝血，取125 μl抗凝血至流式管中，加入125 μl不含血清的培养基和1μl PMA/Ionomycin Mixture (250×)和1 μl BFA/Monensin Mixture (250×)。取125 μl抗凝血和125 μl不含血清的培养基，作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；

1b. 对于使用其它抗凝剂(如EDTA、枸橼酸钠)抗凝血，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs)。用含10%胎牛血清的培养基重悬沉淀，使细胞浓度为1×10⁷/ml。取250μl PBMCs至流式管中，加入1 μl PMA/Ionomycin Mixture (250×) 和1 μl BFA/Monensin Mixture (250×)。以只含PBMCs的样本作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；

1c. 对于脾脏组织，使用适当的方法制备成单细胞悬液，并去除团块。

(可选)使用淋巴细胞分离液分离制备脾单个核细胞。

用含10%胎牛血清的培养基重悬沉淀，使细胞浓度为1×10⁷/ml。取250 μl细胞悬液至流式管中，加入1 μl PMA/Ionomycin Mixture (250×)和1 μl BFA/Monensin Mixture (250×)。以只含细胞悬液的样本作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；

2.从样本管和对照管中取100 μl细胞悬液至新的流式管中，加入5 μl Anti-Mouse CD3ε, FITC 和5 μl Anti-Mouse CD4, PerCP-Cy5.5。震荡混匀，室温避光孵育15分钟；

3.每管加入100 μl FIX & PERM Medium A，震荡混匀，室温避光孵育15分钟；

4.用蒸馏水将10× Flow Cytometry Staining Buffer稀释为1×，每管加入2 ml预冷1×Flow Cytometry Staining Buffer，300 x g离心5分钟，弃上清；

注：液体尽量倒干净，不要有残留；

5.每管加入100 μl FIX & PERM Medium B、5 μl Anti-Mouse IFN-γ, PE和5 μl Anti-Mouse IL-4, APC。震荡混匀，室温避光孵育15分钟；

6.每管加入2 ml 1× Flow Cytometry Staining Buffer，300 x g离心5分钟，弃上清；

7.每管加入500 μl 1× Flow Cytometry Staining Buffer重悬，上机检测；或者加入500 μl 1-4%多聚甲醛重悬，2-8℃避光，于24小时内检测。