ELISA通关必备丨操作篇丨溶解与稀释标准品

ELISA标准曲线是结果计算的尺子，标准品是ELISA 实验成功与否的关键点。怎样正确溶解、稀释标准品呢？

• 粉末标准品短暂离心，让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。
• 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震荡，室温静置溶解 10-30min，让粉末完全溶解。
  注意：加水后暂不用移液枪吹吸，避免蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。
• 标准品梯度稀释：
  1. 标准品稀释液的选择：若血清、血浆、组织匀浆样本，用试剂盒中的标准品稀释液，梯度稀释标准品。
  2. 耗材准备：准备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。
  3. 梯度稀释：根据说明书，每管加入等体积的标准品稀释液（培养基）。吸取同体积溶解好的标准品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中吸取同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。
  4. 空白: 标准品稀释液（培养基）作为空白即零浓度。

  注意：梯度稀释标准品时，涡旋震荡混匀后可短暂离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再开始稀释下个浓度。

标准品溶解、梯度稀释是ELISA实验关键点，按以上方法梯度稀释就可。