应用Annexin V检测细胞凋亡的亲们
还在为凋亡阳性质控而烦恼吗？
补偿调节顺利吗？
来图片
联科生物的发明专利了解一下
应用Annexin V法检测细胞凋亡通常是通过流式细胞仪。利用仪器激光激发荧光染料发出荧光，再通过检测器进行检测分析。但在进行多色分析时，由于不同荧光素的发射光谱之间存在互相重叠现象，需要进行补偿调节。补偿调节时，样本须同时包含阴性细胞群和阳性细胞群，且各自比例最好不要低于20%。如果使用实验中凋亡诱导的阳性样本进行补偿调节，可能会因为凋亡阳性细胞比例较低，导致难以调节补偿或不准确。此外，诱导细胞凋亡受诱导剂浓度、诱导时间等多因素的影响，导致不同的实验需要进行反复多次的条件摸索，可重复性较差。当补偿调节受影响时，分析的结果就会出现假阳性或假阴性。
针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于Annexin V凋亡检测的阳性质控液，用于Annexin V或PI/7-AAD单染时，可检测到比例接近的阳性细胞群和阴性细胞群，可非常方便地用于仪器的补偿调节，操作简单、重复性好、保证结果的可靠性。
仪器参数调节 ：以Annexin V-FITC/PI双染为例
1 、收集1 × 106- 3 × 106个细胞，用预冷 PBS 离心洗涤两次，弃上清。
2、 加入 500 μl 阳性质控液(Apoptosis Positive Control Solution)重悬，置冰上孵育 30 分钟。
3 、用预冷 PBS 离心洗涤，弃上清。
4 、加入适量预冷 1 × Binding Buffer重悬，并加入数量相同且未经处理的活细胞与之混合。加入预冷 1 × Binding Buffer 补充至1.5 ml，等分成三管，其中一管为空白对照管、两管为单染管。
5、 单染管分别加入5 μl Annexin V-FITC 或10 μl PI，室温避光孵育 5 分钟。
6、 在流式细胞仪上，用空白管调节 FSC、SSC 和荧光通道的电压，并在此电压条件下，用单染管调节荧光通道的补偿。
★ 注：某些将贴壁细胞处理为单个细胞的过程中会造成细胞膜损伤，从而造成 Annexin V 假阳性。因此需要进行优化，可使用对细胞更温和的酶如 Accutase 处理贴壁细胞。
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