联科生物NP-40裂解液配方

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作者:联科生物 发布日期:2015-07-21 09:00

NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。 NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、免疫沉淀(immunol precipitation, IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可用 BCA蛋白浓度测定试剂盒(目录号 PQ0011 或 PQ0012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去污剂,不能用 Bradford 法测定蛋白浓度。可参考“各种裂解液主要特点、差异和选择”选择合适的裂解液 。

本产品已添加 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和 leupeptin等多种抑制剂,可有效抑制蛋白降解。如需添加 PM SF,请在临用前加入。
一、 使用方法对于培养细胞样品:
1. 融解 NP-40 裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后,细胞就会被裂解。

3.对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,须分装成50 - 100万细胞/管,然后再裂解。

4.裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大,裂解液的用量到200 μl或250μl。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解 NP-40 裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5. 充分裂解后,10000 - 14000 g离心3 - 5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
二、注意事项
1. 为达到最佳的裂解效果,尽量避免过多的反复冻融。可适当分装后使用。

2. 需自备PMSF。PMSF (WB018或WB0181) 可向联科订购。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或2 - 8℃进行。

4. 为了您的安全和健康,请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。
三、部分相关产品

目录号 WB019 WB020 WB021 WB022
产品名称 RIPA裂解液(中) RIPA裂解液(强) RIPA裂解液(弱) Western及IP细胞裂解液
有效裂解成分 1% NP-40, 0.5%deoxycholate, 0.1% SDS 1% Triton X-100, 1%deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40, 0.25%deoxycholate 1% Triton X-100
裂解强度 温和 温和
膜蛋白的提取 较好 很好 一般 一般
胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好 很好
核蛋白的提取 较好 很好 较好 较好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好 很好
细胞核转录因子提取 很好 很好 很好 很好
含蛋白酶抑制剂
含磷酸酯酶抑制剂
主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP WB, IP, co-IP
目录号 WB023 WB024 WB0201 WB0221
产品名称 NP-40裂解液 SDS裂解液 RIPA裂解液(强,无抑制剂) Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)
有效裂解成分 1% NP-40 1% SDS 1% NP-40, 0.25% deoxycholate 1% Triton X-100
裂解强度 温和 温和 温和
膜蛋白的提取 一般 很好 一般 一般
胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好 很好
核蛋白的提取 较好 较好 较好 较好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好 很好
细胞核转录因子提取 很好 很好 很好 很好
含蛋白酶抑制剂
含磷酸酯酶抑制剂
主要用途 WB, IP, co-IP WB, ChIP WB, IP, co-IP WB, IP, co-IP