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01细胞周期检测方法（两种）
1、一步法活细胞检测
1.1样品制备，收集2×105-1×106个活细胞，离心弃上清，用PBS洗涤一次，离心弃上清
1.2复染，加入1 m L DNA staining solution（Cat#CCS01），涡旋振荡5 - 10秒混匀。室温避光孵育30分钟，进行流式检测。
2、活细胞/固定细胞检测
2.1可当天检测的活细胞样本
2.1.1收集2×105-1×106个细胞，离心弃上清。用PBS洗涤一次，离心弃上清
2.1.2加入1 m L DNA Staining solution 和10 μ L Permeabilization solution（Cat#CCS012），涡旋振荡5-10秒混匀。室温避光孵育30分钟
2.1.3选择最低上样速度，在流式细胞仪上进行检测。
2.2当天无法检测的活细胞样本
2.2.1按照下述方法固定，或其他合适的方法固定
a.收集2×105-1×106个细胞，离心弃上清。轻弹管壁，使沉淀重悬在残余的液体中，加入1 m L 室温下的PBS
b.将细胞缓慢加入至3 m L 无水乙醇(-20℃预冷)中，边加边高速搅拌。-20℃固定过夜，可保存数月
2.2.2检测当天，将固定细胞离心，弃去乙醇，轻弹管壁使沉淀松散，加入2-5 m L 室温下的PBS，放置15分钟使细胞再次水化。离心，弃上清
2.2.3加入1 m L DNA staining solution，涡旋振荡5-10秒混匀，室温避光孵育30分钟
2.2.4选择最低上样速度，在流式细胞仪上进行检测。
02实验结果展示
03实验注意事项
1、制备单细胞悬液：操作应轻柔，减少碎片。
2、最低速度上机检测：降低CV，避免仪器把相邻细胞当做一个细胞。
3、排除粘连体：避免细胞粘黏检测的DNA含量为非2倍体，导致实验结果不准确。
4、PI的坐标选线性：线性更能体现DNA含量的倍数关系。
5、实验放最后做：由于PI具有黏性，通常周期实验放在最后做，否则需要深度清洗后，再进行其他实验。
6、固定细胞后，虽然可以保持较长时间再上机，但是为了保证最佳的实验效果，建议在一个小时之内上机，避免时间过长细胞黏连较多，影响实验结果的准确性。04实验常见问题及解决方案
看完之后是不是对周期实验有了进一步了解，大家还有其它实验问题也可以跟小科交流哈，欢迎大家在公众号留言。
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